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抗原修復(fù)技術(shù)概述

 更新時(shí)間:2022-06-17 點(diǎn)擊量:1829

抗原修復(fù)技術(shù)主要用于增強(qiáng)免疫組織化學(xué)檢測(cè)中的信號(hào)。下面介紹一下抗原修復(fù)方法和修復(fù)技巧。
一、抗原修復(fù)方法
固定是在免疫組織化學(xué)過程中進(jìn)行的一個(gè)關(guān)鍵步驟,以保持組織形態(tài)。然而,這種方法也可能對(duì)免疫組織化學(xué)產(chǎn)生不利影響,因?yàn)樗?jīng)常改變蛋白質(zhì)生物化學(xué)并掩蓋感興趣蛋白質(zhì)的表位。因此,一抗無法與蛋白質(zhì)結(jié)合,導(dǎo)致信號(hào)強(qiáng)度低。這種掩蔽效應(yīng)可能是由表位中氨基酸的交聯(lián)或無關(guān)但存在于表位附近的肽的交聯(lián)引起的。這會(huì)改變抗原的構(gòu)象或靜電荷。在抗原修復(fù)過程中,這種掩蔽被逆轉(zhuǎn),從而可能發(fā)生抗原與表位之間的結(jié)合。
二、抗原修復(fù)技巧
抗原修復(fù)基于幾個(gè)變量,例如目標(biāo)抗原、抗體、組織類型以及固定的持續(xù)時(shí)間和方法。通常,多克隆抗體在不使用抗原修復(fù)方法的情況下可能會(huì)更好地工作,因?yàn)樗鼈冏R(shí)別多個(gè)表位。然而,單克隆抗體依賴于對(duì)單個(gè)特定表位的識(shí)別才能發(fā)揮作用。正在使用多種策略來檢索抗原。有些方法就像改變抗體稀釋劑中陽(yáng)離子的pH值或濃度一樣簡(jiǎn)單,這也可以改變抗體及其表位的親和力。


在表位被部分掩蓋的情況下,可以在嘗試其他抗原修復(fù)方法之前增加一抗孵育。然而,必須首先優(yōu)化孵育時(shí)間、溫度和濃度的這些參數(shù)。目前使用兩種主要方法來檢索抗原。
1.蛋白酶誘導(dǎo)表位修復(fù) (PIER)
在這種方法中,不同的酶用于恢復(fù)抗原和表位之間的結(jié)合。這個(gè)過程應(yīng)該通過切割形成表位的肽來工作。然而,PIER成功率低,在此過程中可能會(huì)破壞組織形態(tài)和抗原。
2.熱誘導(dǎo)表位修復(fù) (HIER)
        在該技術(shù)中,熱量用于逆轉(zhuǎn)交聯(lián)并恢復(fù)原始和三級(jí)表位結(jié)構(gòu)。該方法針對(duì)每種組織、固定方法和感興趣的抗原進(jìn)行了優(yōu)化。
在這種情況下,使用微波爐、壓力鍋、蒸鍋、高壓釜或水浴提供熱量。這種方法比PIER方法有更高的成功率。在此過程中,樣品在更換緩沖液之前會(huì)短時(shí)間加熱。
某些實(shí)驗(yàn)室使用溫度設(shè)置為 60°C 的水浴,然后將載玻片在修復(fù)溶液中孵育過夜。
      如果切片在高溫下從載玻片上脫落(可能用于骨骼、軟骨和皮膚),此類技術(shù)可能很有用。在這種方法中,載玻片在加熱之前先冷卻。HIER 受時(shí)間、溫度、緩沖液和 pH 值的影響,該方案是通過反復(fù)試驗(yàn)確定的。
三、抗原修復(fù)的局限性是什么?
抗原修復(fù)過程通常需要將樣品牢固地粘附在載玻片上。此外,這種方法對(duì)于某些樣品通常過于苛刻,例如低溫恒溫器組織和酒精固定組織。還需要優(yōu)化每個(gè)樣品的溫度、時(shí)間和 pH 值;在決定每個(gè)樣品的最佳條件之前,需要測(cè)試這些條件。

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