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使用實(shí)驗(yàn)室儀器進(jìn)行小鼠抗體生產(chǎn)技術(shù)

 更新時(shí)間:2023-02-10 點(diǎn)擊量:819

小鼠抗體是科研實(shí)驗(yàn)中常用的一種抗體,它主要有IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM五種類(lèi)型,下面小編就小鼠抗體分類(lèi)及使用實(shí)驗(yàn)室儀器進(jìn)行小鼠抗體生產(chǎn)技術(shù)做一下簡(jiǎn)單介紹:

小鼠抗體同種型/類(lèi)、亞類(lèi)和小鼠抗體同種型

與人類(lèi)相同,小鼠有五種抗體同種型(IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM)。每個(gè)同種型都有不同的重鏈。同種型也稱(chēng)為類(lèi)。抗體的另一個(gè)名稱(chēng)是免疫球蛋白,因此后綴“Ig"表示抗體類(lèi)別和亞類(lèi)。幼稚 B 細(xì)胞產(chǎn)生 IgM 和 IgD。在 B 細(xì)胞成熟過(guò)程中,通過(guò)同種型轉(zhuǎn)換,成熟的 B 細(xì)胞將產(chǎn)生 IgG、IgA 或 IgE 同種型和亞類(lèi)中的一種。不同的同種型在體內(nèi)具有不同的半衰期,從 12 小時(shí)到 8 天不等 。

小鼠同種型基因

每條重鏈由可變區(qū)和恒定區(qū)組成。恒定區(qū)為不同的基因,盡管它們僅構(gòu)成免疫球蛋白重鏈的一部分。
對(duì)于 IgG2a 和 IgG2c 同種型:具有 Igh1-b 等位基因的近交小鼠品系具有 IgG2c 同種型,而不是 IgG2a 。除其他同種型外,鼠類(lèi)重鏈基因座僅具有這兩種同種型基因中的一種。小鼠 IgG2a 支架有時(shí)用于重組抗體表達(dá)。
表 1 列出了小鼠抗體類(lèi)別、子類(lèi)、基因名稱(chēng)以及 NCBI 和 IMGT 基因數(shù)據(jù)庫(kù)的鏈接。
小鼠抗體
表 2 列出了實(shí)驗(yàn)室中一些常用動(dòng)物物種的不同同種型和亞類(lèi)基因組。IgG2a 在某些小鼠品系中不存在,例如 C57BL、SJL 和 NOD 小鼠,它們具有 IgG2c。
抗體類(lèi)型
小鼠抗體分子量
IgA、IgD 和 IgG 的重鏈具有一個(gè)具有三個(gè)免疫球蛋白 (Ig) 結(jié)構(gòu)域的恒定區(qū)。例如小鼠IgA重鏈恒定區(qū)有344個(gè)氨基酸,小鼠IgG1恒定區(qū)有324個(gè)氨基酸。其他類(lèi)型的重鏈可能具有不同數(shù)量的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。例如,分泌型和膜結(jié)合型 IgD 重鏈恒定區(qū)有兩個(gè) Ig 結(jié)構(gòu)域。IgE 和 IgM 的重鏈有一個(gè)帶有四個(gè)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的恒定區(qū)。小鼠 IgM 重鏈恒定區(qū)有 475 個(gè)氨基酸。來(lái)自所有同種型的重鏈都有一個(gè)帶有單個(gè)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的可變區(qū)。
      每個(gè)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域長(zhǎng)約 110 個(gè)氨基酸。每條IgD和IgG重鏈約450個(gè)氨基酸,每條IgE和IgM重鏈約550個(gè)氨基酸。每條輕鏈(kappa 或 lambda)都有一個(gè)恒定的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和一個(gè)可變的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域,大約有 211 到 217 個(gè)氨基酸。常見(jiàn)的 IgG 同種型的分子量為 150 KD。在還原條件下,每條重鏈約為50 KD,每條輕鏈約為25 KD。IgM 往往以五聚體或六聚體形式存在,其中 IgM 分子通過(guò)二硫鍵共價(jià)連接,從而產(chǎn)生 970 KD 的分子量。由于免疫球蛋白是糖基化的,因此表觀分子量可能與標(biāo)稱(chēng)分子量不同,有時(shí)甚至區(qū)別較大。
小鼠抗體生產(chǎn)
    小鼠是單克隆抗體產(chǎn)生的主要?jiǎng)游锼拗?,也是多克隆抗體產(chǎn)生的宿主。小鼠單克隆抗體生產(chǎn)也會(huì)涉及到實(shí)驗(yàn)室儀器、實(shí)驗(yàn)耗材及一些科研試劑。比如:用外源抗原以及常用的弗氏佐劑或新型水溶性 QuickAntibody對(duì)小鼠(通常是BALB/c小鼠, 進(jìn)行免疫。小鼠單克隆抗體也可以通過(guò)將來(lái)自特定小鼠品系的未免疫脾細(xì)胞與自身抗體融合直接獲得,如抗 SM Y12 抗體的情況。其他菌株,如 C57BL/6 、NMRI、C3H 和 SJL,以及其他佐劑如殼聚糖、LQ 或弗氏佐劑,以及過(guò)表達(dá)免疫原的埃文細(xì)胞,也可以使用?;蚬こ绦∈笃废狄部梢宰鳛樗拗鏖_(kāi)發(fā)特異性抗體,例如通過(guò)β3Gn-T5基因敲除小鼠開(kāi)發(fā)了一種對(duì)GM3神經(jīng)節(jié)苷脂具有高結(jié)合特異性的IgG單克隆抗體。
      截至2022年6月5日,科研數(shù)據(jù)庫(kù)列出了針對(duì)12039個(gè)人類(lèi)基因、7144個(gè)小鼠基因、6475個(gè)大鼠基因以及來(lái)自其他156個(gè)物種的11079個(gè)基因的254742個(gè)小鼠單克隆抗體。
    大多數(shù)單克隆抗體是在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的。通常使用抗小鼠二抗。 二抗多數(shù)為山羊抗小鼠。
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