成年美女黄网站色大免费视频,娇妻销魂的交换经历,精品黑人一区二区三区 ,日本极品人妻videossex

歡迎進(jìn)入蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司!
技術(shù)文章
首頁 > 技術(shù)文章 > DNA重組實(shí)驗(yàn)技術(shù)總結(jié)

DNA重組實(shí)驗(yàn)技術(shù)總結(jié)

 更新時(shí)間:2023-02-15 點(diǎn)擊量:1012

DNA重組技術(shù),是分子的生物學(xué)研究生需要掌握的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一,DNA重組實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)如下:
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

體外連接獲得重組分子,用于轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞。


二、實(shí)驗(yàn)原理

DNA重組技術(shù)是用內(nèi)切酶分別將載體和外源DNA切開,經(jīng)分離純化后,用連接酶將其連接,構(gòu)成新的DNA分子。

外源DNA片段和質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)策略有以下幾種:

1、帶有非互補(bǔ)突出端的片段 用兩種不同的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行消化可以產(chǎn)生帶有非互補(bǔ)的粘性末端,這也是最容易克隆的DNA片段,一般情況下,常用質(zhì)粒載體均帶有多個(gè)不同限制酶的識(shí)別序列組成的多克隆位點(diǎn),因而幾乎總能找到與外源DNA片段末端匹配的限制酶切位點(diǎn)的載體,從而將外源片段定向地克隆到載體上。也可在PCR擴(kuò)增時(shí),在DNA片段兩端人為加上不同酶切位點(diǎn)以便與載體相連。

2、帶有相同的粘性末端 用相同的酶或同尾酶處理可得到這樣的末端。由于質(zhì)粒載體也必須用同一種酶消化,亦得到同樣的兩個(gè)相同粘性末端,因此在連接反應(yīng)中外源片段和質(zhì)粒載體DNA均可能發(fā)生自身環(huán)化或幾個(gè)分子串連形成寡聚物,而且正反兩種連接方向都可能有。所以,必須仔細(xì)調(diào)整連接反應(yīng)中兩種DNA的濃度,以便使正確的連接產(chǎn)物的數(shù)量達(dá)到hi水平。還可將載體DNA的5'磷酸基團(tuán)用堿性磷酸酯酶去掉,最大限度地抑制質(zhì)粒DNA的自身環(huán)化。帶5'端磷酸的外源DNA片段可以有效地與去磷酸化的載體相連,產(chǎn)生一個(gè)帶有兩個(gè)缺口的開環(huán)分子,在轉(zhuǎn)入

E.coli受體菌后的擴(kuò)增過程中缺口可自動(dòng)修復(fù)。

3、帶有平末端 是由產(chǎn)生平末端的限制酶或核酸外切酶消化產(chǎn)生,或由DNA聚合酶補(bǔ)平所致。由于平端的連接效率比粘性末端要低得多,故在其連接反應(yīng)中,T

4 DNA連接酶的濃度和外源DNA及載體DNA濃度均要高得多。通常還需加入低濃度的聚乙二醇(PEG 8000)以促進(jìn)DNA分子凝聚成聚集體的物質(zhì)以提高轉(zhuǎn)化效率。

特殊情況下,外源DNA分子的末端與所用的載體末端無法相互匹配,則可以在線狀質(zhì)粒載體末端或外源DNA片段末端接上合適的接頭(linker)或銜接頭(adapter)使其匹配, 也可以有控制的使用E. coli DNA聚合酶Ⅰ的klenow大片段部分填平3'凹端,使不相匹配的末端轉(zhuǎn)變?yōu)榛パa(bǔ)末端或轉(zhuǎn)為平末端后再進(jìn)行連接。


三、 主要試劑

   T

4 連接酶、無菌水、質(zhì)粒和PCR的酶切產(chǎn)物。
四、儀器耗材

   微量移液槍,Tip頭、PCR反應(yīng)管、低溫水浴鍋。


五、 連接反應(yīng)   

質(zhì)粒酶切產(chǎn)物    1

PCR酶切產(chǎn)物    4

T

4 ligase         1

10×bf           1

H

2O            3

-------------------------------

Total          10 μL



六、注意事項(xiàng)

1. 操作時(shí),注意保持低溫狀態(tài),因?yàn)長igase酶很容易降解。

2. 連接反應(yīng),一般14-16℃,O/N.

蘇州阿爾法生物14年專注于  微量移液槍,Tip頭、PCR反應(yīng)管、水浴鍋、實(shí)驗(yàn)室冰箱等實(shí)驗(yàn)室儀器和耗材供應(yīng)以及 T4 連接酶、無菌水、質(zhì)粒提取試劑盒、DNA提取試劑盒,更多PCR相關(guān)內(nèi)容進(jìn)入蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材網(wǎng)站了解。


国内老熟妇对白hdxxxx| 另类老熟女hd| 中国老熟女重囗味hdxx| 我与美艳yin荡丝袜的老师| 精品无码久久久久久久久久| 无码精品国产av在线观看| 同桌上课脱裙子让我帮他自慰| 精品国产18久久久久久| 成人欧美一区二区三区1314| 国产老妇伦国产熟女老妇视频 | 长篇乱肉合集乱500小说| 国产精品夜间视频香蕉| 玩弄了裸睡少妇人妻野战| 色欲精品国产一区二区三区av| 久久婷婷五月综合色丁香| 把腿扒开做爽爽视频| 国内老熟妇对白xxxxhd| AV无码专区亚洲AVL在线观看| 白少洁第1一40章免费阅读| 男男肠道灌水失禁play| a级毛片毛片免费观看丝瓜| 精品亚洲一区二区三区在线观看| 国内少妇偷人精品视频免费| 欧美日韩在线视频| 刺激videoschina偷拍| 免费a级毛片| 老板含着她的花蒂啃咬高潮的视频| 粉嫩虎白扒开小泬| 欧美日韩亚洲精品瑜伽裤| 黑人巨大精品欧美一区二区| 第一次进入女朋友的身体注意事项 | AV大片在线无码永久免费| 色综合视频一区中文字幕| 男人扒女人添高潮视频| babescom欧美熟妇| 小梅的性荡生活| 国产精品扒开腿做爽爽爽A片小说| 性色av网站| 人妻丰满熟妇无码区免费| 久久综合AV色老头免费观看| 国产超碰人人做人人爱ⅴa|