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熒光定量PCR儀是一種能夠定量測量DNA模板數(shù)量的實(shí)驗(yàn)設(shè)備

 更新時間:2023-06-24 點(diǎn)擊量:495
  一、概述
  熒光定量PCR儀是一種能夠定量測量DNA模板數(shù)量的實(shí)驗(yàn)設(shè)備,它通過利用特殊的熒光探針技術(shù)來檢測PCR反應(yīng)體系中目標(biāo)序列的擴(kuò)增情況。本文將著重介紹其技術(shù)原理、工作流程及應(yīng)用領(lǐng)域等方面。
  二、技術(shù)原理
  熒光定量PCR(qPCR)是在傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增基礎(chǔ)上加入了熒光信號檢測模塊而發(fā)展出來的新型分子生物學(xué)方法。qPCR的開發(fā)使得我們可以更快地監(jiān)測和診斷感染性疾病,同時也可應(yīng)用于其他多樣化領(lǐng)域中。
  其基本原理為:在PCR反應(yīng)體系中添加一個雙鏈DNA片段所對應(yīng)序列位置上引物,該引物含有兩個相互抵消的非共價結(jié)合螺旋橋段,并連接一個局部菲羅顯色組分;當(dāng)綁定到拷貝數(shù)目足夠多時,則會放射出強(qiáng)烈穩(wěn)定可見波長范圍內(nèi)的帶譜突峰信號,并最大限度降低背景雜訊產(chǎn)生率,從而提高數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和靈敏度。通常,熒光定量PCR可以分為TaqMan法、SYBRGreen法等多種技術(shù)實(shí)現(xiàn)方式。
  三、工作流程
  1.樣品制備:將待測的DNA分子從樣本中提取出來,并加入適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)體系緩沖液中進(jìn)行純化和檢測處理。
  2.PCR反應(yīng)配置:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,在熒光定量PCR儀上設(shè)置好所需擴(kuò)增的DNA序列及引物、孵育溫度、放大周期等參數(shù)。然后,按照設(shè)定步驟依次向每個試管內(nèi)加入合適數(shù)量的DNA模板及其他反應(yīng)成分,保證其在特定條件下能夠完成目標(biāo)擴(kuò)增過程。
  3.執(zhí)行PCR循環(huán)程序:通過精確控制熒光信號計數(shù)器在不同時間點(diǎn)或溫度下發(fā)射出來信號波動幅度大小值,在整個PCR循環(huán)過程中持續(xù)監(jiān)測并記錄下被放大產(chǎn)生物質(zhì)(如靶基因)相對于背景雜訊之間的比例關(guān)系。同時,結(jié)合前期已有數(shù)據(jù)統(tǒng)計信息和概率模型推演算法,可以快速準(zhǔn)確地估算出樣品原始含量并輸出相應(yīng)結(jié)果報告。
  四、應(yīng)用領(lǐng)域
  由于qPCR技術(shù)具有高靈敏性、高特異性、快速等優(yōu)點(diǎn),因此已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)臨床檢測、病毒檢測、食品安全監(jiān)測等領(lǐng)域。同時,在生物科學(xué)研究中也可以利用qPCR技術(shù)來分析基因表達(dá)水平、評估DNA修復(fù)能力和藥物代謝度等問題,有助于推動相關(guān)學(xué)科的進(jìn)一步發(fā)展。
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