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HEI-OC1細胞培養(yǎng)方法

 更新時間:2023-10-25 點擊量:1491

一、HEI-OC1細胞來源

HEI-OC1細胞是一種由美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)創(chuàng)建的內(nèi)耳研究細胞系。該細胞系源自一位成年女性的耳蝸組織,經(jīng)過原代培養(yǎng)和傳代,形成了具有穩(wěn)定生長特性的細胞系。

二、培養(yǎng)基和添加物

1. 培養(yǎng)基:建議使用DMEM/F12培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基含有多種氨基酸、維生素和生長因子,能夠支持HEI-OC1細胞的生長。

2. 添加物:為了維持細胞的健康生長,需要添加適量的生長因子和抗生素。例如,轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、地塞米松和青霉素等。

三、培養(yǎng)條件

1. 溫度:適宜的培養(yǎng)溫度為37℃,在此溫度下細胞能夠正常生長。

2. 濕度:維持培養(yǎng)基濕度在95%左右,以保證細胞的正常生長。

3. 氣體環(huán)境:使用5% CO295%空氣的培養(yǎng)箱,以維持培養(yǎng)基的pH值。

四、傳代和凍存

1. 傳代:當HEI-OC1細胞生長到80%-90%匯合度時,可以使用胰蛋白酶進行傳代。將細胞從培養(yǎng)瓶中取出,用胰蛋白酶消化后進行離心,再加入新鮮的培養(yǎng)基進行接種。

2. 凍存:為了長期保存HEI-OC1細胞,可以采用凍存技術(shù)。將細胞接種到凍存管中,加入適量的保護劑(如二甲基亞砜),然后置于-80℃冰箱中冷凍保存。

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五、HEI-OC1細胞培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基配制:

使用DMEM/F12培養(yǎng)基,添加10%胎牛血清(FBS),1% L-谷氨酰胺和1%青霉素/鏈霉素(或抗生素)。根據(jù)需要可添加其他的生長因子或化合物。

1. 培養(yǎng)皿處理:

使用70%酒精或其它消毒液對培養(yǎng)皿進行消毒處理。將消毒液均勻涂抹于培養(yǎng)皿表面并靜置片刻,然后將液體倒掉,培養(yǎng)皿繼續(xù)放置在無菌通風柜中。在培養(yǎng)皿上均勻涂抹培養(yǎng)基并使其整個表面均勻分布,接下來置于37℃的培養(yǎng)箱中至少30分鐘,確保培養(yǎng)皿內(nèi)的溫度均勻。

2. 細胞解凍和接種:

HEI-OC1細胞迅速從液氮中取出,立即放到37℃預熱的水浴中,快速震蕩使其解凍,然后立即將細胞離心并重新懸浮于預先加熱的培養(yǎng)基中。計算細胞濃度,并按所需細胞數(shù)接種到培養(yǎng)皿中。細胞接種后放置在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中。

3. 細胞傳代:

一般情況下,當細胞密度達到80-90%時需要傳代。傳代的時間不宜過長,否則細胞易失去生長特性。以下是HEI-OC1細胞的傳代步驟:

   a. 倒掉培養(yǎng)皿中的舊培養(yǎng)基,用PBS或無菌的生理鹽水洗滌細胞。

   b. 加入一定體積的胰酶/EDTA溶液(如0.05% trypsin/EDTA),對細胞進行消化。消化時間一般不超過5分鐘,觀察細胞的形態(tài)變化,當細胞間出現(xiàn)較大的縫隙時即表示消化完成。

   c. 停止消化,加入相應體積的培養(yǎng)基中和胎牛血清,輕輕拍打培養(yǎng)皿使細胞充分懸浮。

   d. 計算細胞濃度,并按所需細胞數(shù)接種到新的培養(yǎng)皿中。

   e. 培養(yǎng)皿放置于培養(yǎng)箱中,在37℃下培養(yǎng)。

五、細胞培養(yǎng)注意事項:

- HEI-OC1細胞對培養(yǎng)基的組分和濃度比較敏感,建議使用DMEM/F12培養(yǎng)基,添加10%胎牛血清(FBS)等。

細胞密度過高可能會影響細胞生長和附著性,需要根據(jù)細胞的特點和實驗的需求調(diào)整細胞密度。

細胞的傳代時間要合適,不能過長,否則細胞易失去生長特性,建議根據(jù)細胞生長情況和實驗需求進行傳代。

注意細菌、真菌污染的預防,進行細胞培養(yǎng)時保持無菌操作。

HEI-OC1細胞培養(yǎng)常見問題:

問:復蘇了好幾次課題組之前凍存的HEI-OC1細胞,每次都是要么染菌要么傳代后大量漂浮,有時候還會出現(xiàn)不生長的現(xiàn)象,沒有培養(yǎng)超過五代的,大概是什么原因?

答:對于你提到的問題,可能有以下幾個原因?qū)е逻@種現(xiàn)象的出現(xiàn):

1. 培養(yǎng)皿處理不充分:培養(yǎng)皿表面不干凈或沒有充分消毒,這可能導致細胞附著不良或細菌污染。

2. 細胞密度過高:細胞密度過高會導致細胞互相附著,并形成團塊,難以正常生長和分裂。

3. 培養(yǎng)基成分不合適:不同批次的胎牛血清會有差異,可能會影響細胞的生長和附著性。

建議你在進行細胞培養(yǎng)時注意以上問題的排除。如果仍然存在問題,建議咨詢細胞培養(yǎng)專家或經(jīng)驗豐富的研究人員,以獲取更具體的解決方案。

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