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實(shí)例應(yīng)用-如何計(jì)算DNA片段中的分子數(shù)

 更新時(shí)間:2022-05-18 點(diǎn)擊量:2730

實(shí)驗(yàn)室數(shù)學(xué)在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析中一直是一個(gè)令人頭疼的問題?在定量PCR實(shí)驗(yàn)中,常常會(huì)遇到計(jì)算 DNA 片段中的分子、計(jì)算溶液的濃度或計(jì)算連續(xù)稀釋等,這樣的計(jì)算有沒有什么好的方法呢?

當(dāng)然有了,在本文中,我們將教你簡(jiǎn)單的 DNA 樣本中的分子計(jì)數(shù)法。

——例如,套入公式即可一招輕松拆解:500 ng 樣本中有多少個(gè) 50 堿基對(duì) (bp) 片段的模板 /副本這樣的棘手問題。使您很快就會(huì)成為實(shí)驗(yàn)室中的計(jì)算高手!

一、計(jì)算 DNA片段中分子數(shù)量的應(yīng)用

在進(jìn)行以下類型的實(shí)驗(yàn)時(shí),通常需要DNA分子的計(jì)算

DNA 連接。

生化分析。

實(shí)時(shí) PCR(絕對(duì)定量)。

測(cè)量載體基因組的數(shù)量。

二、分子數(shù)計(jì)算公式的原理

我們知道,單個(gè) DNA bp 的平均重量為 650 道爾頓。這也可以寫為 650 g/mol摩爾質(zhì)量)。因此,任何雙鏈 DNA 片段的分子量或摩爾質(zhì)量都可以通過將其長(zhǎng)度(以 bp 為單位)乘以 650來計(jì)算,答案將表示為道爾頓或 g/mol

只要我們知道序列長(zhǎng)度(即基因組的長(zhǎng)度/大?。?,此計(jì)算將適用于任何物種的基因組 DNA。

三、實(shí)例與應(yīng)用:

1.實(shí)例問題: 5.2-kb 質(zhì)粒的分子量是多少?記住 5.2 kb = 5200 bp

計(jì)算: 5200 bp x 650 道爾頓 = 3,380,000 道爾頓或 g/mol

現(xiàn)在我們知道如何計(jì)算 DNA 模板的分子量了。使用阿伏伽德羅數(shù),即 6.022 x 10 23分子/摩爾,可以使用以下公式計(jì)算每模板的分子數(shù):

計(jì)數(shù)

2.實(shí)例問題:您有 300 ng 的 5.2-kb 質(zhì)粒。你的質(zhì)粒有多少 拷貝

分?jǐn)?shù) 

3.實(shí)例問題:您有 50 ng 的 20-bp 引物。你的引物有多少份?

引物份數(shù)

4.實(shí)例問題:您有 150 ng 的 670 bp 純化 PCR 產(chǎn)物,你有多少份 PCR 產(chǎn)物?

 

注意:此公式基于您使用的是單一 DNA 物種的假設(shè),因此在應(yīng)用于 PCR 產(chǎn)物或質(zhì)粒時(shí),請(qǐng)確保您只有 個(gè)條帶或您有干凈的質(zhì)粒小量制備。

所以實(shí)驗(yàn)中,只要知道 DNA 片段的長(zhǎng)度和以納克為單位的濃度,您就可以輕松應(yīng)用該公式來獲得任何類型的 DNA 樣本中的拷貝數(shù)。

四、其他分子量計(jì)算常用的公式

分子量計(jì)算

DNA分子量計(jì)算

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