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攪拌罐生物反應(yīng)器培養(yǎng)貼壁細(xì)胞如何選擇微載體

 更新時間:2023-04-11 點擊量:1078

    微載體能夠在攪拌罐生物反應(yīng)器中培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。然而,不存在用于微載體選擇的穩(wěn)健、可轉(zhuǎn)移的方法,研究提供很少或沒有解釋為什么使用微載體的原因。我們系統(tǒng)地評估了來自三個供體的用于人骨髓來源的 MSC (hBM-MSCs) 擴增的 13 種微載體,以建立一種可重現(xiàn)和可轉(zhuǎn)移的微載體選擇方法。單層研究證明了輸入細(xì)胞系在生長動力學(xué)和代謝物通量方面的變異性。

    與 hBM-MSC2 和 hBM-MSC3 相比,HBM-MSC1 在三個傳代中經(jīng)歷了更多的累積群體倍增。在 100 mL 轉(zhuǎn)瓶中,攪拌條件明顯優(yōu)于靜態(tài)條件,與供體無關(guān),并且相對微載體性能相同,其中相同的微載體在生長動力學(xué)和代謝物通量方面優(yōu)于其他微載體。微載體上供體細(xì)胞之間的相對生長動力學(xué)與單層研究相同。選擇塑料微載體作為 hBM-MSC 擴增的最佳微載體。HBM-MSCs 被成功收獲和表征,證明了 hBM-MSC 免疫表型和分化能力。這種方法為微載體選擇提供了一種系統(tǒng)方法,研究結(jié)果確定了對基于微載體的同種異體細(xì)胞療法制造的潛在重要生物加工影響。相對微載體性能相同,其中相同的微載體在生長動力學(xué)和代謝物通量方面優(yōu)于其他微載體。

[細(xì)胞培養(yǎng)微載體]

一、間充質(zhì)干細(xì)胞簡介

  1970 年代的開創(chuàng)性工作促成了間充質(zhì)干細(xì)胞/基質(zhì)細(xì)胞 (MSC) 的分離和鑒定;這些細(xì)胞現(xiàn)在被認(rèn)為是基于細(xì)胞的CTR、組織工程和再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用的前景候選者,因為它們具有多能性、體外生長傾向、有希望的功效數(shù)據(jù)、易于分離  和免疫調(diào)節(jié)特性然而,人類間充質(zhì)干細(xì)胞 (hMSC) 能否有效轉(zhuǎn)移到廣泛的實際應(yīng)用中,在很大程度上取決于大規(guī)模制造平臺的開發(fā),以生產(chǎn)滿足實際需求所需的全功能細(xì)胞。

二、攪拌罐生物反應(yīng)器培養(yǎng)貼壁細(xì)胞

   貼壁培養(yǎng)的主要策略包括細(xì)胞培養(yǎng)瓶、細(xì)胞工廠、生物反應(yīng)器培養(yǎng)等。與單層培養(yǎng)相比,基于微載體的生物反應(yīng)器系統(tǒng)具有更大的表面積與體積比,并且可以提供過程控制、靈活操作(即分批、補料分批、灌注)、通過葉輪攪拌實現(xiàn)均勻培養(yǎng)條件等額外優(yōu)勢,培養(yǎng)基和細(xì)胞材料  的易于獲取的采樣以及原位收獲的能力 正因為如此,科學(xué)家針對 hMSC對這些系統(tǒng)進行了大量研究  以及其他貼壁依賴性細(xì)胞類型。

   值得注意的是,目前已經(jīng)報道了許多不同類型的微載體,每種都具有不同的結(jié)構(gòu)(即實心珠、大孔、可酶消化) 、涂層(纖連蛋白、膠原蛋白、明膠)和粒徑。盡管有許多涉及 hMSC 和微載體培養(yǎng)的研究調(diào)查了培養(yǎng)過程的各個方面,但沒有一套統(tǒng)一的 hMSC 微載體擴增培養(yǎng)條件。這在一定程度上是可以理解的,因為由于供體差異以及研究的相對初期而不可避免地產(chǎn)生差異,最早成功的 MSC 微載體擴展僅在 2007 年報道。

三、攪拌罐生物反應(yīng)器培養(yǎng)貼壁細(xì)胞如何選擇微載體?

選擇合適的微載體是微載體/攪拌罐生物反應(yīng)器細(xì)胞擴增的基本組成部分。從細(xì)胞CTR加工的角度來看,預(yù)計一旦選擇,選擇的微載體將需要始終保持不變,特別是在實際開發(fā)的后期階段(II 期和 III 期),此時過程被“鎖定" '. 此時的任何變化都可能構(gòu)成制造過程的重大變化,需要進行重要的可比性測試和重復(fù)臨床試驗。因此,最重要的是從一開始就根據(jù)嚴(yán)格的選擇方法選擇較佳的微載體

Kehoe 及其同事進行了一項類似的研究,其中包括對細(xì)胞可恢復(fù)性的調(diào)查,發(fā)現(xiàn)雖然 Cytodex-1 似乎能促進細(xì)胞生長,但與 SoloHill 膠原蛋白微載體相比,它的細(xì)胞可恢復(fù)性較低。

    蘇州阿爾法生物提供的生物反應(yīng)器、一次性生物反應(yīng)器、片狀載體等實驗室儀器廣泛應(yīng)用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞規(guī)?;瘮U增,創(chuàng)新藥研究等領(lǐng)域。


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